Отцеживание икры и спермы необходимо проводить одновременно. Осеменение должно произойти в течение 10 мин после взятия икры.
В отцеженную икру добавляют одновременно сперму из 2—3 пробирок и в течение 5—10 с после осеменения икры половые продукты быстро и тщательно перемешивают гусиным пером.
При большем промежутке времени между осеменением и перемешиванием овариальная жидкость, которая окружает икринки, сильно активизирует часть сперматозоидов, из-за чего в дальнейшем не все икринки приходят в контакт со спермиями при активизации их раствором Хамора или водой.
Затем в емкость добавляют раствор Хамора или воду в таком количестве, чтобы жидкость закрывала икру слоем в 1 см. Содержимое емкости сразу быстро перемешивают в течение 3—5 с. Задержка в перемешивании икры со спермой (после добавления раствора Хамора) даже на 5 с снижает оплодотворение икры на 15 %, а на 30 с — приводит к оплодотворению только 1/4 части икры.
При отсутствии раствора Хамора используют чистую воду. В момент добавления раствора происходит проникновение сперматозоида в икринку через микропиле. После этого емкость с икрой оставляют в темноте на 5—10 мин.
Сразу после оплодотворения икринка начинает впитывать воду через водопроницаемую оболочку — хорион. В это время эластичность оболочки икры увеличивается, достигая своего максимума спустя 3 ч после оплодотворения. Толщина оболочки достигает 1/30 мм, а масса составляет от 14 до 20% массы икринки. После оплодотворения под действием воды икринка выделяет в перевителлиновое пространство осмотически активные вещества, которые способствуют впитыванию воды. Наличие перевителлинового пространства предохраняет эмбрион от внешних воздействий, обеспечивая зародышу постоянное дорсальное положение с помощью жировых капель.
После 5—10 мин покоя икру промывают на специальном столе, освобождая от спермы и посторонних примесей путем частой смены воды. При осмотическом втягивании воды в перевителлиновое пространство икринка как бы временно приклеивается к поверхности емкости, но это не имеет ничего общего с обычной клейкостью икры. Икра радужной форели слабоклейкая.
В емкость с отмытой икрой подают воду слабой струей, чтобы икра не выносилась из нее. Икра набухает примерно 2 ч, после чего ее можно закладывать на инкубацию. В результате набухания масса икринки увеличивается до 16, а объем до 20%, оболочка приобретает упругость.
Спустя 2 ч после оплодотворения при температуре 8 °С происходит слияние ядер икринки и сперматозоида и завершается процесс оплодотворения. Через несколько часов начинается деление бластодиска, на этой стадии икринки очень чувствительны к механическим воздействиям и вибрации. Поэтому помещение икринок в инкубатор следует проводить не позднее чем через 8 ч после оплодотворения.
Применяют и другой способ оплодотворения икры, когда в сперму предварительно добавляют разбавитель — раствор Хенкса, в котором она неподвижна. Известно, что для радужной форели при использовании разбавителя спермы оптимальным является соотношение: 1 яйцеклетка к 0,3 млн спермиев, а наиболее благоприятные условия для максимального оплодотворения икры могут быть созданы при осеменении яйцеклетки в 10—100 мм3 оплодотворяющей жидкости.
После тщательного перемешивания икры и неподвижной спермы в растворе Хенкса добавляют пресную воду из такого расчета, чтобы на одну икринку приходилось около 5 мм3 жидкости.